而且，西班牙和尼德蘭之間的事務從某種意義上來說，應當算得上是“政”。英國對本就信仰天主教的荷蘭輸出新教，當然會激化與西班牙之間的矛盾。久而久之，英國和尼德蘭的關係愈發切，同時與西班牙的關係則越來越糟糕，也就不奇怪了。

在這期間還發生了一件大事，伊麗莎白的表侄蘇格蘭王瑪麗一世(不是腓力二世的老婆那個瑪麗一世)因信仰天主教，被腓力二世與天主教會認定是正統英國王。

1567年，瑪麗因貴族叛變而遭到囚，並被迫將蘇格蘭王位讓給的子詹姆斯。驚險逃後，迅速逃往英格蘭，卻又被姑姑伊麗莎白囚。此後直至瑪麗過世的二十年間，伊麗莎白與詹姆斯的敵對者仍然不停地籌劃將瑪麗推上英蘇二國王的寶座。

而利益方面的衝突也日益嚴峻，英國在西班牙大陸、洲及大西洋的私掠行為(西班牙視其為海盜)嚴重影響西班牙的王室收。

英國的大西洋奴隸貿易——由約翰·霍金斯爵士於1562年發起——獲得伊麗莎白的支持，其無視西班牙政府控訴霍金斯在加勒比地區西屬民地的貿易實已構走私，更是讓西班牙對英國視如仇寇。

1568年9月，一支由霍金斯與法蘭西斯·德雷克爵士領導的奴隸買賣遠征隊遭到西班牙突擊，造數艘船艦於墨西哥韋拉克魯斯沉船，即聖胡安戰役。

這場戰使英西二國關係迅速惡化，翌年英國便扣押了數艘西班牙派遣至荷蘭支援軍隊的珍寶艦隊。德雷克與霍金斯則加強私掠以突破西班牙在大西洋貿易的壟斷。

為達宣揚新教的人生宗旨，伊麗莎白提供法國宗教戰爭與荷蘭革命的新教勢力援助、對抗西班牙。與此同時，腓力二世則大力制新教的傳播，資助法國戰爭的天主教聯盟、支持爾蘭的第二次德斯蒙德戰爭(1579年－1583年)，擁護爾蘭天主教徒反抗伊麗莎白。

1585年，伊麗莎白與荷蘭簽訂楠薩奇條約，同意供予人力、馬匹與津。腓力二世將此視為伊麗莎白對西班牙的宣戰。

戰爭實際上於1585年就已經發。德雷克駛往西印度群島，在聖多明哥、卡塔赫納、佛羅里達州的聖奧古斯丁進行劫掠。英國投了這場後世被稱為“八十年戰爭”的戰爭之中，站在早先宣布離西班牙統治而獨立的荷蘭新教聯邦即尼德蘭聯邦一方。

腓力二世決議侵英國，但1587年4月德雷克炸毀37艘在加的斯港口的西班牙船艦後，侵計劃隨之阻。

同年2月8日，伊麗莎白一世決蘇格蘭王瑪麗一世，怒了歐洲的天主教徒。的英國王權(指蘇格蘭王瑪麗一世)按照的個人意願，傳予腓力二世——簡單略的說，也就是表侄把自己繼承英國王的權力讓渡給了姑父。

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